酶標(biāo)儀(Microplate Reader)是對酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。
酶標(biāo)儀的工作原理
使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。
檢測單位:
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示,OD是opticaldelnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度,OD=10g(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表示被吸收的光密度,Ⅰ0為在檢測物之前的光強(qiáng)度,Ⅰ為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算:
E=OD=C×D×E
其中:C為檢測物的濃度;D為檢測物的厚度;E為摩爾因子。
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測,稱為測量波長。
但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下,檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
酶標(biāo)儀維護(hù)保養(yǎng)注意事項(xiàng):
1、儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓,低于40分貝的環(huán)境下;
2、應(yīng)避免陽光直射以防止設(shè)備老化;
3、操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間;
4、運(yùn)行中操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定;
5、操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵;
6、保持干燥、干凈、水平的工作臺面,足夠大的操作空間;
7、使用加液器加液,加液頭不能混用;
8、盡量配套使用洗板機(jī)洗板,能有效避免交叉污染;
9、在測量過程中,請勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時擠傷操作人員的手;
10、請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請洗手;
11、如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明,以防對操作人員造成損害。
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