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學(xué)會(huì)正確地進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，養(yǎng)好細(xì)胞是很多實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。
然而，對(duì)于養(yǎng)細(xì)胞的人來(lái)說(shuō)，真的是不想看到細(xì)胞的污染。
細(xì)胞的污染將直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)材料的不純凈，造成數(shù)據(jù)的錯(cuò)誤，及后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠。
因此，細(xì)胞的污染一旦出現(xiàn)，往往代表著實(shí)驗(yàn)按下暫停鍵，又要重復(fù)進(jìn)行前面的細(xì)胞獲取和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，很可能幾個(gè)月的埋頭苦干就此白費(fèi)。
細(xì)胞培養(yǎng)中的常見(jiàn)污染
細(xì)胞污染是一個(gè)很廣的范圍，微生物的種類更是各種各樣，不同的污染的原因不同處理也不同，因此掌握對(duì)常見(jiàn)細(xì)胞污染的識(shí)別至關(guān)重要。
細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類型有細(xì)菌污染、支原體污染、黑膠蟲(chóng)污染、真菌污染、病毒污染以及交叉污染等污染。
每一種污染都有各自的特點(diǎn)。如細(xì)菌和霉菌增殖迅速，短時(shí)間就對(duì)細(xì)胞造成明顯傷害；而支原體和病毒對(duì)細(xì)胞的影響則是一種緩慢長(zhǎng)期的過(guò)程。
污染的預(yù)防
微生物污染在細(xì)胞培養(yǎng)中是非常常見(jiàn)的，也是令人頭大的一件事情。而預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。
根據(jù)統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的污染源，常常來(lái)自于不潔的環(huán)境和不規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，比如受污染的培養(yǎng)基、試劑或儀器。因此，一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
（1）在培養(yǎng)液中添加抗生素。
可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測(cè)細(xì)胞某項(xiàng)指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（2）從消毒滅菌著手
①細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌試驗(yàn)陰性后才能使用。
玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒：1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上；2)干烤消毒140℃ 2小時(shí)以上。
培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無(wú)菌試驗(yàn)：將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi)，用無(wú)菌的玻璃離心管或玻璃瓶取完全培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天，肉眼見(jiàn)無(wú)渾濁或沉淀等異物。分裝后置4℃保存。
消化液(pH7.8)或其它加入液，應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無(wú)菌濾器過(guò)濾除菌，分裝成置-20℃保存。
②操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。
定期清洗或更換超凈臺(tái)過(guò)濾膜、預(yù)濾網(wǎng)。
CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方，應(yīng)1-2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)箱定期進(jìn)行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁、隔板、水盤2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外燈照射1h以上或進(jìn)行高溫高壓滅菌處理。水盤內(nèi)加入無(wú)菌水（應(yīng)每周更換），待培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細(xì)胞。
在細(xì)胞間內(nèi)準(zhǔn)備專用的儀器如離心機(jī)，移液器，水浴鍋等，并定期進(jìn)行消毒，減少細(xì)胞污染的可能性。
③實(shí)驗(yàn)環(huán)境的徹底消毒
甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑，其水溶液和氣體對(duì)各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。
實(shí)驗(yàn)環(huán)境紫外照射 15~30 min 滅菌
（3）規(guī)劃實(shí)驗(yàn)操作
雖然，養(yǎng)細(xì)胞的步驟很簡(jiǎn)單無(wú)非是換液、傳代、凍存、復(fù)蘇。但是具體有好多小細(xì)節(jié)需要注意....
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室環(huán)境時(shí)，佩戴好口罩及手套，穿上潔凈實(shí)驗(yàn)服，避免灰塵或唾液進(jìn)入培養(yǎng)物中。
超凈臺(tái)用紫外燈照射30-60min，并開(kāi)啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5-10min，然后用75%酒精球擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面，再開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。
進(jìn)入超凈臺(tái)前應(yīng)用75%酒精對(duì)雙手及手腕進(jìn)行全面擦拭，確保除菌完全。
實(shí)驗(yàn)用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺(tái)內(nèi)。生物安全柜和超凈工作臺(tái)里的東西能少盡少。東西過(guò)多會(huì)干擾氣流，反而更不安全，并且在物品的擺放要有一定的順序分區(qū)要規(guī)劃好。這樣細(xì)胞在生物安全柜或者超凈臺(tái)才能安全。
操作動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量不要說(shuō)話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
操作時(shí)小心取用無(wú)菌物品，應(yīng)避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應(yīng)立即更換；手及物品不要在暴露的瓶口上方來(lái)往，容器打開(kāi)后，傾斜45度操作，操作完成后及時(shí)蓋上瓶蓋。
操作時(shí)要常更換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺(tái)面。
實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)移出超凈臺(tái)，以利于空氣流通。
實(shí)驗(yàn)完成后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面。
（4）防止細(xì)胞交叉污染
在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，即使不同細(xì)胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細(xì)胞間的交叉污染。
每次操作最好只處理一種細(xì)胞，多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生不同細(xì)胞間的污染；
在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí)，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。
（5）所有新購(gòu)入或接入的細(xì)胞，必須及時(shí)保種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)，這是抵御污染最直接有效的辦法。
養(yǎng)好細(xì)胞的方法就一種，就是細(xì)心，在操作上下功夫
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